pRL-TK-intronle
发布日期：2025-01-04 17:16 点击次数：172
基本信息
名称：pRL-TK-intronless哺乳报告质粒
别称：pRL-TK-intronless
原核抗性:
Amp
克隆菌株:
DH5a
培养条件:
37度
质粒属性
载体宿主：
哺乳细胞
载体用途：
信号报告
基因种属：
基因类型：
原核抗性：
Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
rLuc
质粒简介
pRL-TK-intronless是一个哺乳海肾荧光素报告质粒，由武汉淼灵生物科技有限公司构建并共享至淼灵质粒平台。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3811 bp ds-DNA circular SYN 03-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3811
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 8..759
/label=HSV TK promoter
/note="herpes simplex virus thymidine kinase promoter"
promoter 772..790
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 800..1735
/codon_start=1
/product="luciferase from the anthozoan coelenterate
Renilla reniformis (sea pansy)"
/label=Rluc
/translation="MTSKVYDPEQRKRMITGPQWWARCKQMNVLDSFINYYDSEKHAEN
AVIFLHGNAASSYLWRHVVPHIEPVARCIIPDLIGMGKSGKSGNGSYRLLDHYKYLTAW
FELLNLPKKIIFVGHDWGACLAFHYSYEHQDKIKAIVHAESVVDVIESWDEWPDIEEDI
ALIKSEEGEKMVLENNFFVETMLPSKIMRKLEPEEFAAYLEPFKEKGEVRRPTLSWPRE
IPLVKGGKPDVVQIVRNYNAYLRASDDLPKMFIESDPGFFSNAIVEGAKKFPNTEFVKV
KGLHFSQEDAPDEMGKYIKSFVERVLKNEQ"
polyA_signal 1766..1887
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
promoter 2020..2124
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 2125..2985
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 3156..3744
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 agatctaaat gagtcttcgg acctcgcggg ggccgcttaa gcggtggtta gggtttgtct
61 gacgcggggg gagggggaag gaacgaaaca ctctcattcg gaggcggctc ggggtttggt
121 cttggtggcc acgggcacgc agaagagcgc cgcgatcctc ttaagcaccc ccccgccctc
181 cgtggaggcg ggggtttggt cggcgggtgg taactggcgg gccgctgact cgggcgggtc
241 gcgcgcccca gagtgtgacc ttttcggtct gctcgcagac ccccgggcgg cgccgccgcg
301 gcggcgacgg gctcgctggg tcctaggctc catggggacc gtatacgtgg acaggctctg
361 gagcatccgc acgactgcgg tgatattacc ggagaccttc tgcgggacga gccgggtcac
421 gcggctgacg cggagcgtcc gttgggcgac aaacaccagg acggggcaca ggtacactat
481 cttgtcaccc ggaggcgcga gggactgcag gagcttcagg gagtggcgca gctgcttcat
541 ccccgtggcc cgttgctcgc gtttgctggc ggtgtccccg gaagaaatat atttgcatgt
601 ctttagttct atgatgacac aaaccccgcc cagcgtcttg tcattggcga attcgaacac
661 gcagatgcag tcggggcggc gcggtcccag gtccacttcg catattaagg tgacgcgtgt
721 ggcctcgaac accgagcgac cctgcagcga cccgcttaaa agcttagtac ttaatacgac
781 tcactatagg ctagccacca tgacttcgaa agtttatgat ccagaacaaa ggaaacggat
841 gataactggt ccgcagtggt gggccagatg taaacaaatg aatgttcttg attcatttat
901 taattattat gattcagaaa aacatgcaga aaatgctgtt atttttttac atggtaacgc
961 ggcctcttct tatttatggc gacatgttgt gccacatatt gagccagtag cgcggtgtat
1021 tataccagac cttattggta tgggcaaatc aggcaaatct ggtaatggtt cttataggtt
1081 acttgatcat tacaaatatc ttactgcatg gtttgaactt cttaatttac caaagaagat
1141 catttttgtc ggccatgatt ggggtgcttg tttggcattt cattatagct atgagcatca
1201 agataagatc aaagcaatag ttcacgctga aagtgtagta gatgtgattg aatcatggga
1261 tgaatggcct gatattgaag aagatattgc gttgatcaaa tctgaagaag gagaaaaaat
1321 ggttttggag aataacttct tcgtggaaac catgttgcca tcaaaaatca tgagaaagtt
1381 agaaccagaa gaatttgcag catatcttga accattcaaa gagaaaggtg aagttcgtcg
1441 tccaacatta tcatggcctc gtgaaatccc gttagtaaaa ggtggtaaac ctgacgttgt
1501 acaaattgtt aggaattata atgcttatct acgtgcaagt gatgatttac caaaaatgtt
1561 tattgaatcg gacccaggat tcttttccaa tgctattgtt gaaggtgcca agaagtttcc
1621 taatactgaa tttgtcaaag taaaaggtct tcatttttcg caagaagatg cacctgatga
1681 aatgggaaaa tatatcaaat cgttcgttga gcgagttctc aaaaatgaac aataattcta
1741 gagcggccgc ttcgagcaga catgataaga tacattgatg agtttggaca aaccacaact
1801 agaatgcagt gaaaaaaatg ctttatttgt gaaatttgtg atgctattgc tttatttgta
1861 accattataa gctgcaataa acaagttaac aacaacaatt gcattcattt tatgtttcag
1921 gttcaggggg aggtgtggga ggttttttaa agcaagtaaa acctctacaa atgtggtaaa
1981 atcgataagg atccaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta
2041 tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt
2101 caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc
2161 ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa
2221 gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct caacagcggt
2281 aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt
2341 ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc
2401 atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg
2461 gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga taacactgcg
2521 gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac
2581 atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga agccatacca
2641 aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta
2701 actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat ggaggcggat
2761 aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat tgctgataaa
2821 tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc agatggtaag
2881 ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat
2941 agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt
3001 tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg
3061 aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga
3121 gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta
3181 atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa
3241 gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact
3301 gttcttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca
3361 tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt
3421 accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg
3481 ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag
3541 cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta
3601 agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat
3661 ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg
3721 tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc
3781 ttttgctggc cttttgctca catggctcga c
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
P4625/pCMV-SPORT6-MAD2L2人源基因质粒
P4626/pCMV-SPORT6-PLEK（1点突变）人源基因质粒
P4627/pCMV-SPORT6-CD84人源基因质粒
P4628/pCMV-SPORT6-LRRFIP2人源基因质粒
P4629/pCMV-SPORT6-SECTM1（1点突变1同义突变）人源基因质粒
P4630/pCMV-SPORT6-LCK人源基因质粒
P4631/pCMV-SPORT6-MID2（34-2118bp）人源基因质粒
P4632/pCMV-SPORT6-IFI27L1人源基因质粒
P4633/pCMV-SPORT6-CCDC134人源基因质粒
P4634/pCMV-SPORT6-MAGEA2B(1同义突变1点突变）人源基因质粒
